【介紹】

   布魯氏菌間接 ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)牛、羊、豬等動(dòng)物血清中的布魯氏菌特異性抗體。本試劑盒采用間接 ELISA 法，在酶標(biāo)板微孔上預(yù)包被純化的布魯氏菌抗原。在試驗(yàn)中，加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過(guò)溫育后，若樣品中含有布魯氏菌病特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其它成分后，加入酶標(biāo)二抗，與檢測(cè)板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合，再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在微孔中加入 TMB 底物液，經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)孔中的吸光度 OD 值。

【操作步驟】

1. 取預(yù)包被的檢測(cè)板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清取 100μl 加入到檢測(cè)板孔中。同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照 1 孔，陽(yáng)性對(duì)照 2 孔，取陰性及陽(yáng)性對(duì)照各 100μl分別加入反應(yīng)孔中，輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。

2. 蓋上封板膜（可按實(shí)際需要自行裁剪），置 37℃溫育 30分鐘。

3. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加 250μl，甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù) 4~6 次，最后在干凈吸水紙上拍干。

4. 每孔加酶標(biāo)記物 100μl，蓋上封板膜，置 37℃溫育 30 分鐘。

5. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌 4~6 次，方法同 3。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

6. 每孔加顯色液 100μl，輕微震蕩混勻、蓋上封板膜 37℃避光顯色 10 分鐘。

7. 每孔加終止液 50μl，使反應(yīng)終止，10 分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀于

450nm 測(cè)定 OD 值。

【結(jié)果判定】

用酶標(biāo)儀于 450nm（630nm 作參比波長(zhǎng)）讀取吸光度 OD 值。

試驗(yàn)成立的條件：

陰性對(duì)照（N）OD 值＜0.2，同時(shí)陽(yáng)性對(duì)照（P）OD 值＞0.6。

計(jì)算方法：

樣品 OD 值÷陽(yáng)性對(duì)照 OD 均值＝S/P 值

陰陽(yáng)性判斷：

S/P 值＞0.3 判斷為陽(yáng)性；

S/P 值≤0.3 判斷為陰性。

【貯存條件及有效期】2~8℃下貯存 12 個(gè)月

批準(zhǔn)文號(hào)：獸藥生字191478818